【小议】消光系数UV法偏差大于10%，你用吗？

消光系数是蛋白表达质控一个很有用的指标，通过UV280吸收值和蛋白含量来计算。我们采用的是凯氏定氮法，根据多年实践经验，在合理的样品前处理情况下，蛋白含量测量偏差在5%以内。该方法虽然麻烦点，但是结果比较靠谱。

文献报道了纯UV法，大致原理是，以氨基酸【FWY】的UV模拟蛋白的UV，通过变性校正，得到一套经验系数，从而得到蛋白的消光系数。从文献给出的数据看，偏差为10%。如果考虑文献发表前很可能剔除了某些偏差大的数据【这个不稀奇吧】，可以推测，纯UV法测消光系数的偏差应该会大于10%。

UV法的极大优势就是简单、快速、用量少，但是准确度不太高。为什么会这样呢？极重要的还在于其原理本身有欠缺:游离氨基酸不可能等同于蛋白链上的氨基酸，不变性肯定不行，变性了也不行。而且，变性操作还会带来潜在的蛋白损失和浓度改变的不重复性。

总之，UV法可用于要求不太高的场合。我们只采用凯氏定氮法，不使用UV法。



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【wkh, 2020-01-05 16:26:45】 【责任人 wkh】 [已阅读 699 次]